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          基爾頓生物科技 JRDUN BIOTECHNOLOGY
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          Products 細胞實驗
          產品名稱: 流式檢測
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          流式檢測大致分為流式細胞術、細胞周期檢測、細胞增殖檢測、細胞因子檢測 一、流式細胞術(FlowCytometry,FCM):   就是對在高速流動的鞘液包裹下的細胞、粒子進行分析和分選的技術,這種細胞或粒子是經過特異熒光標記的。其特點是測量速度快,每秒鐘能測數千個乃至上萬個細胞,且可進行多參數測量,另一特點是在分析的同時可把具有指定特征的細胞分離出來,這就是分選技術。   重要參數:前向角散射(FSC):前向角散射光的強度與細胞的大小有關,也就是說,同一個細胞群體,FSC強的,其細胞大一些,而FSC弱的,其細胞小一些。側向角散射(SSC):側向角散射又稱90°散射或大角散射。側向角散射光對細胞膜、胞質、核膜的折射率更為敏感,對胞內較大的顆粒也會有反應。所以,側向角散射光的強弱可反應細胞內精細結構和顆粒的性質。熒光信號(FL):是細胞或細胞上的熒光染料被激光激發后發射出的熒光,不同的熒光染料其發射波長不同。通過熒光強度可將同一個細胞群體中的有熒光標記的細胞與無熒光標記的細胞區分開來,也就是我們通常所說的陽性細胞,也可以將陽性細胞...
          產品名稱: 原代細胞分離
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、細胞培養1取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的初次培養稱為原代培養。2培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。3凍存及復蘇(可參閱后面有關章節)為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養基,以的冷卻速度凍存,終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間是無限的。復蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。 二、原代細胞分離凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據需要收獲目的...
          產品名稱: 細胞侵襲實驗
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          細胞侵襲實驗目的:研究趨化因子或其他營養物質對細胞侵襲的影響。實驗原理:將細胞種于上室,趨化因子等種于下室,細胞會向營養成分高的下室跑。與遷移實驗不同是侵襲實驗需要在小室聚碳酸酯膜上鋪設一層基質膠。用以模仿體內細胞外基質,細胞欲進入下室,先要分泌基質金屬蛋白酶(MMPs)將基質膠降解,方可通過聚碳酸酯膜。計數進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的侵襲能力。實驗材料儀器:超凈工作臺、CO2培養箱、生物倒置顯微鏡實驗內容與方法:1. 將細胞種于上室,趨化因子等種于下室2. 培養時間后觀察計數細胞形態或測定相關理化性質客戶提供實驗信息:1、實驗信息(客戶提供):2、實驗材料提供(1)樣本材料:生長狀況良好的宿主細胞株,細胞培養條件(2)試劑:Transwell小室需客戶提供或委托我公司代購,如有藥物則提供加藥濃度結果提交:提交實驗報告書(實驗試劑與設備、實驗過程、結果分析、原始數據、細胞圖片等); 目前,基爾頓生物主營實驗技術服務,如想了解細胞侵襲的更多內容,你可以通過網頁咨詢在線客服,或致電我們將熱情為您服務!
          產品名稱: 細胞遷移
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹細胞遷移是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一,是機體正常生長發育的生理過程,也是活細胞普遍存在的一種運動形式。胚胎發育、血管生成、傷口愈合、免疫反應、炎癥反應、動脈粥樣硬化、癌癥轉移等過程中都涉及細胞遷移。檢測細胞遷移能力的實驗包括劃痕實驗和Transwell實驗。 二、實驗原理細胞劃痕實驗是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法,在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央區域劃線,去除中央部分的細胞,然后繼續培養細胞至實驗設定的時間是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法,實驗成本低,可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力。Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養板中,小室內稱為上室,培養板內稱為下室,上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔,上室內添加上層培養液,下室內添加下層培養液。將細胞種在上室內,由于膜有通透性,下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞,從而可以研究下層培養液中的成...
          產品名稱: 細胞劃痕
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          細胞劃痕介紹:細胞劃痕是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法,實驗成本低,可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力。 細胞劃痕內容:材料:6 孔板(其他的也可以,但感覺6孔比較好,大小適中)、marker筆直尺、20微升槍頭(滅菌)、無血清培養基、PBS步驟:能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)1.先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻得劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2.在空中加入約5X105個細胞,具體數量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿。3.第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜。4.用PBS洗細胞3次,去處劃下的細胞,加入無血清培養基。5.放入37度5%co2培養箱,培養。按0,6,12,24小時取樣,拍照。 細胞劃痕注意事項:一般做劃痕實驗,都是在無血清或者底血清狀態下培養的,否則細胞增殖就不能忽略。按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點,作為固定的檢測點,這就解決了前后觀察時位置不固定的問題。目前,基爾頓生物科技(上海)有限...
          產品名稱: 細胞增殖
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹細胞增殖是生物體的重要生命特征,細胞以分裂的方式進行增殖。通過細胞分裂,可以將復制的遺傳物質,平均地分配到兩個子細胞中去。細胞增殖實驗包括MTT法和CCK8法。二、服務流程1、細胞培養2、藥物處理3、試劑處理4、測定吸光度5、撰寫實驗報告三、客戶提供1、培養好的細胞(大于106)以及所需藥品。2、藥物作用方式(藥物濃度、時間等)。四、交付內容實驗報告:詳細操作步驟、統計分析。五、服務列表項目周期MTT法5個工作日CCK8法5個工作日
          產品名稱: 血管生成技術
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹腫瘤血管生成是一個極其復雜的過程,一般包括包括血管內皮基質降解、內皮細胞移行、內皮細胞增殖、內皮細胞管道化分支形成血管環和形成新的基底膜等步驟。由于腫瘤組織這種新生血管結構及功能異常,且血管基質不完善,這種微血管容易發生滲漏,因此腫瘤細胞不需經過復雜的侵襲過程而直接穿透到血管內進入血流并在遠隔部位形成轉移。血管生成(Angiogenesis)是指源于已存在的毛細血管和毛細血管后微靜脈新的毛細血管性血管的生長。無論原發性腫瘤還是繼發性腫瘤,一旦生長直徑超過1~2 mm,都會有血管生成。這是由于腫瘤細胞自身可分泌多種生長因子,誘導血管生成。 二、服務流程方案設計預實驗細胞處理及相關檢測數據分析及出具實驗報告 三、客戶提供目的細胞及信息,實驗分組及方案 四、交付內容實驗報告,包括實驗流程、儀器方法、原始數據及圖片等。周期:2-3個月
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹 大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關,其中線粒體跨膜電位(MMP)的下降,被認為是細胞凋亡級聯反應過程中早發生的事件之一。它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰,則細胞凋亡不可逆轉。 二、實驗原理 JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料,可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在,分別處于不同的熒光發射峰。當JC-1 濃度低或膜電位水平低時,主要以單體形式存在,激發波長為527nm,呈綠色熒光;當JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時,形成聚合物,發出紅色的熒光,激發波長為590nm。當細胞發生凋亡時,線粒體跨膜電位被去極化,JC-1從線粒體內釋放,紅光強度減弱,以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光,根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。 三、實驗流程1. 細胞培養;2. 用適當的方法誘導細胞凋亡,同時設立陰性依照組合陽性對照組,收集細胞;3. 用PBS洗滌細胞三次,收集不多于1×106的細胞;4. 取100 μL 10×...
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹通過流式細胞儀PI染色法對細胞內DNA含量進行檢測時,可以將細胞周期各時相區分為G1/G0期,S期和G2/M期,獲得的流式直方圖對應的各細胞周期可通過特殊軟件計算各時相的細胞百分率。將Annexin V 進行熒光素標記,以標記了的Annexin V作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。 二、服務流程1、細胞固定2、配置染色液3、細胞染色4、上機檢測5、結果分析三、客戶提供培養好的細胞(大于106)。四、交付內容實驗報告:詳細操作步驟、流式上機圖片及統計分析結果。五、服務列表項目說明周期細胞周期流式檢測PI染色5個工作日細胞凋亡流式檢測Annexin V與PI標記5個工作日
          產品名稱: 細胞共培養
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹細胞共培養是指不同的細胞共同培養。共培養體系主要用于誘導細胞向另一種細胞分化,誘導細胞自身分化,維持細胞功能和活力,對細胞增殖進行調控等。細胞共培養體系包括直接共培養體系和間接共培養體系。直接共培養體系,即將2種或2種以上的細胞同時或分別接種于同一孔中,不同種類的細胞之間直接接觸,研究分泌的細胞因子或直接接觸等相互作用方式對細胞的影響;間接共培養體系,即將2種或2種以上的細胞分別接種于不同的載體上,然后將這兩種載體置于同一培養環境之中,使不同種類的細胞共用同一種培養體系而不直接接觸,從而研究細胞分泌和代謝產生的物質對另一種細胞的影響。 二、實驗原理Transwell共培養可實現非接觸性共培養,主要是運用一種特殊的共培養工具進行細胞共培養研究,探討兩種細胞的相互作用情況。transwell小室放入培養板中,小室內稱為上室,培養板內稱為下室,上下層有一張有通透性的聚碳酸酯膜,這層膜帶有微孔,孔徑大為12.0 μm,小為0.1 μm,小于3.0 μm孔徑條件下,細胞不會遷徙通過,使得培養的兩細胞不能相互接觸。 三、實驗流程直接共培養:1. 制備細胞懸液:消化細...
          產品名稱: 細胞實驗
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、細胞培養1取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養。2培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。3凍存及復蘇(可參閱后面有關章節)為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養基,以的冷卻速度凍存,終保存于液氮中。在較低的溫度下,細胞保存的時間是無限的。復蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。 二、原代細胞分離凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據需要收獲目的...
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹穩定細胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉染到宿主細胞并整合到染色體中,用載體中所含的抗性標志進行篩選,篩選得到可穩定表達目的蛋白,或者穩定表達沉默特定基因的細胞株。常用物理方法(電轉)、化學方法(脂質體等)、生物方法(病毒)。 二、實驗原理外源基因在細胞中的表達可分為兩大類,一類是瞬時表達,一類是穩定表達(又叫表達)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達到高水平的表達,但通常只持續幾天。后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可長期表達目的基因。建立穩定細胞株,一般是根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物對靶細胞進行篩選。常用的抗性標記基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)。 三、實驗流程1、載體構建(表達質粒載體、病毒載體);2、轉染/感染;3、目的蛋白初步檢測;4、抗生素篩選;5、目的蛋白再次檢測(定性/半定量);6、單克隆細胞株穩定性檢測。 四、 客戶提供培養好的細胞 五、 公司提供:基本實驗步驟、圖片、數據分析結...
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