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          產品名稱:

          單細胞轉錄組測序

          上市日期:2021-02-24

          簡介:10x Genomics 是基于微流控技術的單細胞系統,可同時獲得100-800000個細胞的表達信息,實現對細胞群體的劃分與細胞群體間基因表達差異的檢測,是腫瘤細胞異質性、免疫細胞群體檢測以及胚胎發育研究的黃金方法。10xGenomics單細胞應用廣泛,可應用的細胞類型有:生殖細胞,胚胎細胞,神經細胞,免疫細胞,腫瘤細胞,干細胞,其他原代細胞。


          1? 實驗流程

          1.1實驗流程圖



          單細胞轉錄組測序

          1.2實驗描述

          1) 細胞質檢RNA,用Countess?II Automated Cell Counter對細胞計數,將細胞濃度調整到理想濃度1×106/mL。

          2) 10x 標記cDNA 片段,含有barcode信息的凝膠珠子首先與細胞和酶的混合物結合,然后被位于微流體'雙十字'連接中的油表面活性劑液滴包裹。液滴非常小,僅能容納一個凝膠珠子,液滴流到儲液器中被收集后,凝膠珠子溶解釋放引物序列,逆轉錄cDNA 片段,并以cDNA 為模板進行PCR 擴增。將每個液滴中含有barcode信息的產物混合,構建測序文庫。

          3) 建庫,首先利用Biorupter 超聲破碎儀將cDNA 打斷成200~300bp左右的片段,加上測序接頭P5 和測序引物R1 等傳統二代測序的建庫過程,最后進行PCR擴增得到DNA 文庫。

          4) 簇生成和測序,利用Qubit 儀器對文庫進行定量,合格的文庫被放置到cBot中進行橋式擴增,生成簇后利用Hiseq 或者Miseq測序儀進行測序。原理是每個循環都加入A,T,G,C 4 種熒光基團標記的dNTP,依據AT、GC 配對,對應的dNTP通過1DNA 聚合酶結合到模板DNA 鏈上,其他未結合的dNTP被洗脫掉,結合的位置釋放出熒光信號,被計算機捕捉到并進行相應轉換,從而得到該位置的堿基信息。

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