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          基爾頓生物科技 JRDUN BIOTECHNOLOGY
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          Products 細胞實驗
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹染色質免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)是用于研究體內DNA與蛋白質相互作用的方法。ChIP不僅可以檢測體內反式因子與DNA的動態作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。 二、服務流程1、甲醛處理細胞2、加入目的蛋白抗體3、加入proteinA4、沉淀抗體-靶蛋白-DNA復合物5、解交聯6、PCR分析 三、客戶提供1、細胞。2、ChIP級別的抗體。3、如ChIP結束后進行檢測,input作為對照;如結束后進行q-PCR,則需要提供預測靶基因結合位點的具體序列或目標靶基因的名稱、種屬、序列或GeneBank Acession Number。 四、交付內容實驗報告:詳細步驟、seq后或q-PCR分析后的結果 五、服務列表項目 備注 周期 ChIP 含一個陽性基因和一個陰性基因檢測 20個工作日 Seq input作為對照 20個工作日 q-PCR 包括引物設計,三個重復,i...
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴增特定DNA片段的方法。常含有目的基因,用體外重組方法將它們插入克隆載體,形成重組克隆載體,通過轉化與轉導的方式,引入適合的寄主體內得到復制與擴增,然后再從篩選的寄主細胞內分離提純所需的克隆載體,可以得到插入DNA的許多拷貝,從而獲得目的基因的擴增。  二、實驗原理外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組,這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統中,將分別經酶切的載體分子與外源DNA分子進行連接。DNA連接酶有兩種:T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能,而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒有的特性,即能使兩個平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低,一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。 T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應分為3步:,T4DNA連接酶與輔助因子AT...
          產品名稱: 流式檢測
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          流式檢測大致分為流式細胞術、細胞周期檢測、細胞增殖檢測、細胞因子檢測 一、流式細胞術(FlowCytometry,FCM):   就是對在高速流動的鞘液包裹下的細胞、粒子進行分析和分選的技術,這種細胞或粒子是經過特異熒光標記的。其特點是測量速度快,每秒鐘能測數千個乃至上萬個細胞,且可進行多參數測量,另一特點是在分析的同時可把具有指定特征的細胞分離出來,這就是分選技術。   重要參數:前向角散射(FSC):前向角散射光的強度與細胞的大小有關,也就是說,同一個細胞群體,FSC強的,其細胞大一些,而FSC弱的,其細胞小一些。側向角散射(SSC):側向角散射又稱90°散射或大角散射。側向角散射光對細胞膜、胞質、核膜的折射率更為敏感,對胞內較大的顆粒也會有反應。所以,側向角散射光的強弱可反應細胞內精細結構和顆粒的性質。熒光信號(FL):是細胞或細胞上的熒光染料被激光激發后發射出的熒光,不同的熒光染料其發射波長不同。通過熒光強度可將同一個細胞群體中的有熒光標記的細胞與無熒光標記的細胞區分開來,也就是我們通常所說的陽性細胞,也可以將陽性細胞...
          產品名稱: 原代細胞分離
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、細胞培養1取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的初次培養稱為原代培養。2培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。3凍存及復蘇(可參閱后面有關章節)為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養基,以的冷卻速度凍存,終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間是無限的。復蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。 二、原代細胞分離凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經特殊分離方法制備而來的原初培養的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據需要收獲目的...
          產品名稱: 細胞侵襲實驗
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          細胞侵襲實驗目的:研究趨化因子或其他營養物質對細胞侵襲的影響。實驗原理:將細胞種于上室,趨化因子等種于下室,細胞會向營養成分高的下室跑。與遷移實驗不同是侵襲實驗需要在小室聚碳酸酯膜上鋪設一層基質膠。用以模仿體內細胞外基質,細胞欲進入下室,先要分泌基質金屬蛋白酶(MMPs)將基質膠降解,方可通過聚碳酸酯膜。計數進入下室的細胞量可反映腫瘤細胞的侵襲能力。實驗材料儀器:超凈工作臺、CO2培養箱、生物倒置顯微鏡實驗內容與方法:1. 將細胞種于上室,趨化因子等種于下室2. 培養時間后觀察計數細胞形態或測定相關理化性質客戶提供實驗信息:1、實驗信息(客戶提供):2、實驗材料提供(1)樣本材料:生長狀況良好的宿主細胞株,細胞培養條件(2)試劑:Transwell小室需客戶提供或委托我公司代購,如有藥物則提供加藥濃度結果提交:提交實驗報告書(實驗試劑與設備、實驗過程、結果分析、原始數據、細胞圖片等); 目前,基爾頓生物主營實驗技術服務,如想了解細胞侵襲的更多內容,你可以通過網頁咨詢在線客服,或致電我們將熱情為您服務!
          產品名稱: 細胞遷移
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹細胞遷移是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一,是機體正常生長發育的生理過程,也是活細胞普遍存在的一種運動形式。胚胎發育、血管生成、傷口愈合、免疫反應、炎癥反應、動脈粥樣硬化、癌癥轉移等過程中都涉及細胞遷移。檢測細胞遷移能力的實驗包括劃痕實驗和Transwell實驗。 二、實驗原理細胞劃痕實驗是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法,在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央區域劃線,去除中央部分的細胞,然后繼續培養細胞至實驗設定的時間是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法,實驗成本低,可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力。Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養板中,小室內稱為上室,培養板內稱為下室,上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔,上室內添加上層培養液,下室內添加下層培養液。將細胞種在上室內,由于膜有通透性,下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞,從而可以研究下層培養液中的成...
          產品名稱: 細胞劃痕
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          細胞劃痕介紹:細胞劃痕是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法,實驗成本低,可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力。 細胞劃痕內容:材料:6 孔板(其他的也可以,但感覺6孔比較好,大小適中)、marker筆直尺、20微升槍頭(滅菌)、無血清培養基、PBS步驟:能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)1.先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻得劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2.在空中加入約5X105個細胞,具體數量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿。3.第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜。4.用PBS洗細胞3次,去處劃下的細胞,加入無血清培養基。5.放入37度5%co2培養箱,培養。按0,6,12,24小時取樣,拍照。 細胞劃痕注意事項:一般做劃痕實驗,都是在無血清或者底血清狀態下培養的,否則細胞增殖就不能忽略。按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點,作為固定的檢測點,這就解決了前后觀察時位置不固定的問題。目前,基爾頓生物科技(上海)有限...
          產品名稱: 細胞增殖
          型號:
          時間: 2017 - 03 - 29
          一、服務介紹細胞增殖是生物體的重要生命特征,細胞以分裂的方式進行增殖。通過細胞分裂,可以將復制的遺傳物質,平均地分配到兩個子細胞中去。細胞增殖實驗包括MTT法和CCK8法。二、服務流程1、細胞培養2、藥物處理3、試劑處理4、測定吸光度5、撰寫實驗報告三、客戶提供1、培養好的細胞(大于106)以及所需藥品。2、藥物作用方式(藥物濃度、時間等)。四、交付內容實驗報告:詳細操作步驟、統計分析。五、服務列表項目周期MTT法5個工作日CCK8法5個工作日
          型號:
          時間: 2021 - 02 - 24
          簡介:10x Genomics 是基于微流控技術的單細胞系統,可同時獲得100-800000個細胞的表達信息,實現對細胞群體的劃分與細胞群體間基因表達差異的檢測,是腫瘤細胞異質性、免疫細胞群體檢測以及胚胎發育研究的黃金方法。10xGenomics單細胞應用廣泛,可應用的細胞類型有:生殖細胞,胚胎細胞,神經細胞,免疫細胞,腫瘤細胞,干細胞,其他原代細胞。1  實驗流程1.1實驗流程圖1.2實驗描述1) 細胞質檢RNA,用Countess®II Automated Cell Counter對細胞計數,將細胞濃度調整到理想濃度1×106/mL。2) 10x 標記cDNA 片段,含有barcode信息的凝膠珠子首先與細胞和酶的混合物結合,然后被位于微流體'雙十字'連接中的油表面活性劑液滴包裹。液滴非常小,僅能容納一個凝膠珠子,液滴流到儲液器中被收集后,凝膠珠子溶解釋放引物序列,逆轉錄cDNA 片段,并以cDNA 為模板進行PCR 擴增。將每個液滴中含有barcode信息的產物混合,構建測序文庫。3) 建庫,首先利用Biorupter 超聲破碎儀將c...
          產品名稱: 外泌體技術服務
          型號:
          時間: 2021 - 02 - 24
          服務介紹:外泌體是包含核酸和蛋白質的小囊泡(30-150 nm),是由各種各樣的細胞分泌產生,在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。本產品是自主開發的外泌體快速提取試劑盒,經過優化處理適用于細胞培養上清液、血清、血漿、尿液和其他體液(腦脊液、腹水、羊水、乳液以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效獲得高純度的外泌體顆粒。操作步驟示例:
          產品名稱: 明暗箱實驗
          型號:
          時間: 2017 - 08 - 10
          主動回避與被動回避回避實驗是利用動物的好暗避光(明暗穿梭)、對厭惡刺激(如足電擊)的恐懼和記憶而建立起來的。所以對實驗者(而不是對動物)而言,回避實驗在技術上與暗示關聯條件恐懼相類似。所用的刺激為溫和的足電擊,發生的反應是動物逃避曾經受到電擊刺激的地方。根據動物的逃避方式分為主動回避和被動回避(active and passive avoidance)。前者要求動物主動從有厭惡刺激的箱中逃離;后者則要求動物遏制自己而不進入有厭惡刺激的箱。根據所用 儀器 設備的不同又可分為穿梭回避、跳臺回避、Y-形迷宮回避。這里主要介紹前兩種回避。一、 實驗設備(一)穿梭回避實驗設備 包括穿梭箱、刺激控制器和計算機。這里介紹美國Med Associates公司生產的ENV-010MC穿梭箱。它包括左右兩個同等大?。?0.3cm*15.9cm*21.3cm)的隔室(compartment)。其中一隔室用一黑色布套包裹,形成暗箱(主動回避可不用暗箱)。兩隔室之間由一個拱形門(8.9cm*11.4cm)相聯,門可由實驗者根據實驗需要關上或打開。隔室地板為不銹鋼柵欄(直徑:大鼠4.8mm,小鼠3.175mm)。...
          產品名稱: 自發活動實驗
          型號:
          時間: 2017 - 08 - 10
          實驗方法原理: 自發活動是正常動物的生理特征。自發活動的多少往往能反映中樞興奮或抑制作用狀態。鎮靜催眠藥地西泮(安定)等中樞抑制藥均可明顯減少小鼠的自發活動;而中樞興奮藥咖啡因等則可增加小鼠的自發活動。小鼠自發活動增減的程度與中樞興奮藥或抑制藥的作用強度成正比。 實驗材料:白鼠 、試劑、試劑盒、苯甲酸鈉***溶液 儀器、耗材、鐘罩、注射器、天平 實驗步驟 一、方法: 取小白鼠2 只,稱體重,分別放入兩個鐘罩內。待小鼠安靜后,分別進行腹腔注射,一只1%苯甲酸鈉***溶液150 mg∕Kg,另一只0.5%安定溶液20 mg∕Kg。給藥10分鐘后,觀察兩只小鼠的活動,比較有何不同。 注意事項 ⒈  小白鼠應盡量選取活潑者,同性。 ⒉  實驗前禁食禁水24 h。 ⒊  實驗建議在20 ℃以上室溫下進行,室溫過低常影響小白鼠活動。 ⒋  實驗建議在上午做,以為小白鼠的活動通常在中午及下午減少。 ⒌  觀察內容如走動、站立、嗅、理毛、舔、撕咬、平衡失調、豎尾等。
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